浙江亚虎实业股份有限公司

    疏水作用层析介质

 

丁基-琼脂糖凝胶 FF

 

一、产品简介:
  “亚虎”牌丁基-琼脂糖凝胶FF是一种将四碳链丁基键合在琼脂糖微球上形成的弱疏水性疏水层析分离介质。该产品保留了天然多糖化合物极好的亲水性及大网架结构,与生物活性大分子有很好的相容性,具有高动态吸附容量,不含带电集团,无离子交换等其他作用,快流速操作等特点,广泛适用于疏水性能较强的蛋白质、多肽的生物大分子实验室规模制备和生物制药、生物工程的大工业化制备,典型应用如重组人粒巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、人集落刺激因子(M-CSF)、表皮生成因子(EGF)的生产以及单克隆抗体的纯化。
  二、理化性能指标:
指标名称
指标
外观
乳白色半透明球状颗粒
配基
-O-CH2CHOHCH2-(CH2)3CH3
基质
6%交联琼脂糖
蛋白静态吸附容量,mgBSA/mL
40(0.5M(NH4)2SO4)
蛋白动态吸附容量,mgBSA/mL
30(0.5M(NH4)2SO4,100cm/h)
配基密度,μmol/ml
50
粒径范围,μm
45-165
运行流速(0.01Mpa/cm柱高)cm/h
20-40
工作温度°C
4-40
耐热(pH7水中,30min)°C
120
耐压MPa/cm柱高
0.05
pH稳定性
2-14(短时间,在位清洗);4-13(长时间)
pH工作范围
3-13
化学稳定范围
常用的水相缓冲液;1mol/L氢氧化钠;8mol/L尿素;
6mol/L盐酸胍;70%乙醇
  三、产品使用方法:
  1. 装柱
  1.1 根据分离目标性质配制初始缓冲液(平衡液)和洗脱缓冲液。
  1.2 将所取凝胶抽干,用初始缓冲液(按凝胶∶缓冲液=3∶1的比例)配成匀浆并脱气。
  1.3 将层析柱垂直固定,底端用水或缓冲液润湿并保持一段液位。
  1.4 用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内,使凝胶在柱内自由沉降,水封层析柱,沉降过夜。
  1.5 连结好柱子顶端活动柱头,打开蠕动泵,让缓冲液用使用时操作流速流过5柱体积,再使用1.5倍的操作流速流过5柱体积,调节适配柱头,使其尽量贴近胶面,最后用2-3倍柱体积的缓冲液平衡柱子。
  注意:所有操作过程不能引入气泡,保证装胶的均匀度。
  2. 平衡
  将平衡缓冲液以操作流速平衡层析柱,观察检测器的变化,直到电导、pH等参数不变。平衡缓冲液根据目标物性质和pH要求可选择含一定浓度的硫酸铵或硫酸钠的Tris-盐酸、PBS、柠檬酸-柠檬酸钠、巴比妥、醋酸-醋酸钠等缓冲液。
  3. 上样
  切换转换阀进行上样,上样量根据样品的性质和层析介质的量进行选择,也可进行线性实验找到最佳上样量;样品的预处理:用含一定浓度的硫酸铵或硫酸钠的平衡液配制,0.45mm微孔滤膜过滤。
  4. 冲洗
  用2-3个柱体积的含一定浓度的硫酸铵或硫酸钠的平衡缓冲液冲洗上样后的层析柱,观察检测器的变化,直到电导、pH等参数不变,此时未吸附的组分被清洗出去。
  5. 洗脱
  丁基-琼脂糖凝胶FF的洗脱可用恒定洗脱、梯度洗脱或者阶跃洗脱,一般推荐减小盐浓度的梯度洗脱进行。
  6. 再生
  用不含盐的平衡缓冲液按操作流速冲洗3-5个柱体积。
  若有失活蛋白质或脂类物质在再生时洗不掉,可用在位清洗(CIP)除去。
  7. 在位清洗(CIP)
  对于强结合蛋白质或脂类物质,可采用以下流程进行在位清洗:1mol/LNaOH洗2个柱体积,4mol/L尿素或3mol/L盐酸胍洗2个柱体积,70%乙醇或30%异丙醇洗2个柱体积,平衡缓冲液洗2个柱体积。
  在位清洗可有效去除介质上的杂质,同时介质上的热源也可基本去除。
  四、包装、贮存、运输、保质期:
  1. 包装:聚胺酯瓶密封包装,规格为250毫升、1升、5升和10升。
  2. 贮存:20%乙醇,4°C冰箱保存。
  3. 运输:4°C、常压、避光。
  4. 保质期:5-10年。