浙江亚虎实业股份有限公司

    亲和层析介质

 

肝素-陶瓷/琼脂糖凝胶

 

一、产品简介:
  “亚虎”牌肝素-陶瓷/琼脂糖凝胶是一种将肝素键合在刚性陶瓷/琼脂糖凝胶复合微球上形成的亲和层析分离介质。该产品的基质采用“shellinagel”模式设计,刚性结构不可压缩,耐压,沉降快,易装柱,且保留了天然多糖化合物极好的亲水性及大网架结构,与生物活性大分子有很好的相容性;介质具有高动态吸附容量,快流速操作等特点,主要用于抗凝血酶Ⅲ、凝血因子、脂蛋白、脂酶和多糖的分离纯化。
  二、理化性能指标:
指标名称
指标
外观
白色球状颗粒
配基
猪来源肝素
基质
刚性陶瓷/琼脂糖凝胶复合微球
蛋白静态吸附容量,mg凝血酶肝素/mL
1.2
蛋白动态吸附容量,mg凝血酶肝素/mL
1(100cm/h)
配基密度,mg肝素/mL
4
粒径范围,μm
45-165
运行流速(0.01Mpa/cm柱高)cm/h
30-50
工作温度°C
4-40
耐热(pH7水中,30min)°C
120
耐压MPa/cm柱高
0.1
pH稳定性
4-13(短时间,在位清洗);4-12(长时间)
pH工作范围
4-10
化学稳定范围
常用的水相缓冲液;0.1mol/L氢氧化钠;8mol/L尿素;
6mol/L盐酸胍;4mol/LNaCl
  三、产品使用方法:
  1. 装柱
  1.1 根据分离目标性质配制初始缓冲液(平衡液)和洗脱缓冲液。
  1.2 将所取凝胶抽干,用初始缓冲液(按凝胶∶缓冲液=3∶1的比例)配成匀浆并脱气。
  1.3 将层析柱垂直固定,底端用水或缓冲液润湿并保持一段液位。
  1.4 用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内,使凝胶在柱内自由沉降,水封层析柱,沉降1-2小时即可。
  1.5 连结好柱子顶端活动柱头,打开蠕动泵,让缓冲液用使用时操作流速流过5柱体积,再使用1.5倍的操作流速流过5柱体积,调节适配柱头,使其尽量贴近胶面,最后用2-3倍柱体积的缓冲液平衡柱子。
  注意:所有操作过程不能引入气泡,保证装胶的均匀度。
  2. 平衡
  将平衡缓冲液以操作流速平衡层析柱,观察检测器的变化,直到电导、pH等参数不变。平衡缓冲液根据目标物性质和pH要求可选择Tris-盐酸、PBS、柠檬酸-柠檬酸钠、巴比妥、醋酸-醋酸钠等缓冲液。
  3. 上样
  切换转换阀进行上样,上样量根据样品的性质和层析介质的量进行选择,也可进行线性实验找到最佳上样量;样品的预处理:用平衡液配制,0.45mm微孔滤膜过滤。
  4. 冲洗
  用2-3个柱体积的平衡缓冲液冲洗上样后的层析柱,观察检测器的变化,直到电导、pH等参数不变,此时未吸附的组分被清洗出去。
  5. 洗脱
  肝素-陶瓷/琼脂糖凝胶的洗脱可用盐溶液进行恒定洗脱、梯度洗脱或者阶跃洗脱,一般推荐增大盐浓度的梯度洗脱进行。
  6. 再生
  用高盐浓度的缓冲液(含2mol/LNaCl)按操作流速冲洗3-5个柱体积,接着用平衡液洗到平衡3-5个柱体积。
  若有失活蛋白质或脂类物质在再生时洗不掉,可用在位清洗(CIP)除去。
  7. 在位清洗(CIP)
  对于强结合蛋白质或脂类物质,可采用以下流程进行在位清洗:0.1mol/LNaOH洗2个柱体积,0.5mol/LNaOH洗2个柱体积,8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍洗2个柱体积,平衡缓冲液洗2个柱体积。
  在位清洗可有效去除介质上的杂质,同时介质上的热源也可基本去除。
  四、包装、贮存、运输、保质期:
  1. 包装:聚胺酯瓶密封包装,规格为25毫升、100毫升、250毫升和1升。
  2. 贮存:20%乙醇,4°C冰箱保存。
  3. 运输:4°C、常压、避光。
  4. 保质期:5-10年。